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阅读次数：8913 发布时间：2016/4/7 21:41:05
加州大学圣地亚哥分校的细胞生物学家Stephan Lange的论文手稿基本上都准备好了，这时他打算再检查核对一下他的抗体：Lange对缺失G蛋白偶联受体的小鼠样品进行染色，按道理说抗体不会出现信号。然而结果却是它显色了，Lange只好把他论文中基于抗体的这部分删去，而剩下的一部分却不足以吸引人了。这令Lange失望极了，不过值得安慰的是，他并不是一个有此体验的实验人员，抗体可以说是生物学实验室里*常用，也*容易出现问题的试剂，而且这种试剂还不便宜。Lange说，一般买来的抗体大约每100mg 200-500美元（当地价格），比黄金还贵（2016年1月的黄金价格为每克35.29美元）。而且有时这些“比黄金还贵的花销”还会打水漂，来自Mol Cell Proteomics杂志的一项研究指出，在被检测的5000种商用抗体中， 只有一半能在Western blotting和免疫组化实验中均有效，一些研究人员还认为问题抗体是许多科学研究无法重复的罪魁祸首。
为此越来越多的科学家希望能提出更高的抗体标准，全球生物标准研究所（Global Biological Standards Institute）由此制定了抗体验证准则和试剂操作手册。但单单是这些并不够，研究所主席Leonard Freedman指出，这还需要多方合作，比如杂志拒绝低标准验证抗体发表论文，资助机构拒绝为可疑试剂提供资金等等。事实上，今年美国NIH将会要求基金申请人验证他们使用的抗体，虽然目前还不影响评分。
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一些制造和出售抗体的公司也在尝试梳理其产品目录，执行更严格的验证检测，提高其试剂的公信力。如antibodies-online公司就已经开始与独立检验单位Science Exchange 展开合作，为已验证的抗体提供一个特殊的“独立验证”徽章。
新的标准开发进程需要时间，目前这一市场是“卖方担保”，但从长期来看，*终抗体有效性的责任还是会落在买方肩上，“科学家们需要能确保他们所使用的每个抗体都经过了验证，”来自洛斯阿拉莫斯国家实验室的分子生物学家Andrew Bradbury说。虽然目前还无法完全做到这一点，The Scientist收集的一些小Tips也许能帮助你发现实验中*灵敏，特异性*强，以及实验可重复的抗体。
了解你所使用的抗体类型
多克隆抗体是对某个抗原产生应答的B细胞分泌的所有免疫球蛋白。为了得到多克隆抗体，步是将靶标蛋白注射入动物，一般是兔子，然后收集动物血清，血清中包含有几种结合在靶标蛋白上的抗体，这些抗体亲和力不同，而且也会有一些与抗原无关的抗体。通常针对同一靶标的多个抗体能提升实验中的信号。
如果需要更一致的抗体，那么就要培养单个B细胞，将它们与永生细胞融合形成、杂交瘤细胞系，产生靶向特殊位点的单克隆抗体。从而找到生成目标抗体的培养基，利用细胞系大批量生产单克隆抗体。
然而即使是在单克隆培养体系中，细胞也有可能停止生成抗体，或者抗体基因发生突变，因此Bradbury指出是走多一步——通过编码序列的DNA来确定单克隆抗体，而不是通过细胞系来确定。对于那些所谓的重组抗体，目标抗体基因应该来自B细胞，并且通过测序，当然前提是序列已经被公布的。无论细胞系发生了什么，采用了这一DNA或者序列的研究人员都可以得到确定的抗体，科学家们甚至可以调整序列，无需注射动物就能获得新的抗体。
同时制造抗体的抗原也很重要，合成肽段也许能生成适用于Western blot的抗体（蛋白已经发生了变性），相反完整蛋白来源的抗体也许就无法检测出变性了的蛋白。
做好实验前工作
毋庸置疑，实验前首先需要科学文献，检查一下其他研究人员追踪你的兴趣靶标时用的是什么抗体。一些厂家和网站（譬如 antibodypedia.com 和 CiteAb.com ）都会列出抗体参考文件。
仔细的翻查这些论文，来自Cell Signaling Technology 公司抗体研发部科学家Anthony Couvillon建议道。看看这些论文是否发表在著名期刊上？作者是否展示了全部Western blots，从中是否能看到其它非特异性条带？他们是否用来合适的对照？
不要以为发表论文中采用*多的抗体就*适合你，挪威奥斯陆大学的蛋白质组学研究专家 Fridtjof Lund-Johansen说。通常每个人使用的都是前人次用的那个抗体。
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