肝素亲和素填料使用

肝素亲和素填料使用

产品介绍

Heparin NUPharose FF和 Heparin NUPharose HP是肝素亲和填料，是在纽龙生物经典的琼脂糖凝胶层析介质基球 NUPharose上键合肝素而成。 FF为 Fast Flow的缩写，具备快流速的特点，可用于快速纯化蛋白质，适用性广，易于放大。 HP为 High Performance的缩写，具备分辨率高的特点。肝素亲和的原理较为复杂，一般认为肝素与蛋白的结合是离子相互作用、氢键与范德华力等多种驱动力共同作用的结果。肝素填料主要用于凝血酶 III、凝血因子、脂蛋白、酯酶、激素、干扰素等的分离纯化。也有文献报道将肝素填料用于外泌体的纯化。产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构，与生物活性大分子有很好的相容性，具有载量高，非特异性吸附少，流速快等特点，适用于各种肝素亲和层析。

使用方法参考

1、色谱柱装填

以下阐述与层析系统连接时，填料的色谱柱装填方法。

1 所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体做脱气处理。

2）填料用量计算：通过沉降定量填料体积，需要的沉降填料体积 =柱体积× 压缩比（也称压缩因子）。沉降体积是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完全读取的稳定体积。 Heparin NUPharose FF的压缩比为 ~1.15 Heparin NUPharose HP的压缩比为 ~1.20。为使达到装柱比，可通过柱头下压的方法，也可以通过高流速压柱。

3）填料清洗：将填料悬液充分摇匀后量取相应体积，抽去液体，并用约 3倍填料体积的纯化水洗涤，重复 3次，以除去保存液。

4）装柱填料悬液准备：将填料转移到适当的容器中，加入适量的装柱液，制成50~75 v%的装柱填料悬液原包装中填料体积分数为使用前搅匀。

5 装填前准备：在清洗干净的层析柱下端加入装柱液，以除去下垫片及层析柱下端的空气，在柱内保留少量的蒸馏水拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。

6 装填将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内（必要时使用装柱器）为避免引入气泡，应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后，用装柱液将装柱器加满，拧紧装柱器上盖，将柱子与层析系统连接。

7）压柱：使柱内填料自然沉降（或 50~150 cm/h的低流速下沉降），待填料沉降完全后（填料与液体的界面清晰），去除装柱器装上上柱头，并将柱头下降至界面处通过高流速（推荐流速见下表，注意柱压不超过 0.3 MPa 继续压柱至界面清晰稳定，标记界面稳定时的柱高。停泵，打开柱头上的阀门 /堵头，关闭柱底的阀门 /堵头，下压柱头至标记位置下方与压缩比对应的位置，旋紧柱头，装柱完成。装柱完成后，需用高流速平衡柱内的填料。

填料保存

填料的初始保存液为 20%乙醇，含 50 mM醋酸钠使用过后可继续用相同的保存液。保存温度在 4~8 ℃为宜不可冻存。

肝素亲和素填料使用

更新时间：2024/4/19 16:25:06