脂质体2000一种新型的核酸转染真核细胞试剂
Lip2000具有以下优点：
在许多细胞类型和形式中转染效率。DNA-Lip2000复合物可以直接添加到培养基（有血清或无血清）中的细胞中。
转染后不需要去除DNA-Lip2000复合物或改变培养基。在4-6小时后，可通过更换刷新介质（可选）来去除复合物
内容和存储
Lip2000以液体形式供应，浓度为1mg/ml。储存于4℃。不要冻结。
产品鉴定
Lip2000已经通过转染HEK293细胞和含有质粒。Lip2000不受微生物污染。
1大多数细胞系的DNA（单位为μg）：Lip2000（单位为μl）在制备配合物时的比率应为1:2至1:3。用0.8-1μg DNA和2-3μl Lip2000转染0.5-2×105细胞，并用2-3μl的Lip2000转染。通过改变DNA/Lip2000的比例来优化转染是可能的。
2高密度转染细胞是关键。90-95%的融合时间建议转染时间获得高效表达水平，并尽量减少细胞生长减少与高转染活性相关。低密度的电池适合条件的优化。注意在实验之间保持标准的播种协议，因为转染效率取决于培养融合。
在转染过程中不要向培养基中添加抗生素，否则会导致细胞死亡。
为了获得更好的结果，您可以选择：
在与DNA络合之前，使用Opti MEM I培养基稀释Lip2000。其他无血清培养基（如DMEM）可用于稀释Lip2000，但转染效率可能会受到影响。
注：一些无血清制剂可抑制Lip2000介导的转染，用于示例：CD 293，293 SFM II和VP-SFM等。24孔格式的转染程序
贴壁细胞：转染前一天，在生长培养基（无抗生素）中培养板细胞，使其在转染时（24孔板0.5-2×105细胞/井）融合90-95%。悬浮细胞：在转染前的一天，在24孔板上放置4-8×105细胞/500μl生长培养基（不含抗生素）。对于每个转染样品，制备DNA-Lip2000配合物如下：
•在50μl Opti MEM I中稀释DNA，使血清培养基不含血清（或其他无血清培养基）。轻轻搅拌。
•使用前轻轻混合Lip2000，然后在50μl Opti MEM I培养基（或其他无血清的培养基）中稀释适当量。轻轻搅拌，室温下孵育5分钟。
注：将稀释的Lip2000与稀释的DNA在30分钟内混合。较长的潜伏期可能会降低活性。如果DMEM用作Lip2000的稀释剂，则在5分钟内与稀释DNA混合。5分钟后，将稀释DNA与稀释Lip2000（总体积为100μl）结合。
•轻轻混合，室温下孵育20分钟，使DNALip2000复合物形成。溶液可能看起来浑浊，但这不会抑制转染。
注：DNA-Lip2000复合物在室温下至少稳定5小时。
2在每个井中加入100μl DNA-Lip2000配合物。来回摇动盘子，轻轻搅拌。
在37℃的CO2培养箱中孵育24-48小时，直到细胞准备好转基因表达的检测。不需要去除复合物或改变培养基，但生长介质在4-6h后可被替换，而不会丧失转染活性。
稳定细胞系：转染后24小时，以1:10或更高稀释度将细胞传至新鲜生长介质中。第二天加入选择性培养基。
悬浮细胞：在细胞中加入DNA-Lip2000复合物4小时后，添加PMA和/或PHA（如有需要）。
提示：对Jurkat细胞，在*终浓度为1μg/ml和50ng/ml时分别添加PHA-L和PMA，可增强CMV启动子活性和基因表达。对于K562细胞，单用PMA就足以增强启动子活性。
要以不同的组织培养方式转染细胞，根据表面积的不同，改变Lip2000、DNA、细胞和培养基的用量（见下表）。在自动化、高通量系统中，推荐在96孔板中转染更大的络合体积。注：可通过在平板中制备的复合物中直接加入细胞悬浮液，快速进行96孔板转染（平板细胞同时转染）。制备复合物，并以两倍细胞密度添加细胞
